ELISA四種檢測法優(yōu)缺點(diǎn)比較

 　　ELISA四種檢測法優(yōu)缺點(diǎn)比較 
　　ELISA檢測是一種廣泛應(yīng)用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫剖析技術(shù)。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)的規(guī)范程序，通常是把蛋白、抗體、或激素等（即抗原）直接或是以捕捉抗體（capture Ab）固定在固相載體上，再參加一級檢測抗體（primarydetection Ab），構(gòu)成一個(gè)抗原抗體的復(fù)合物。若是該抗體現(xiàn)已用酶（enzyme）符號了，即可用來直接測定抗原的量，若無，則可運(yùn)用另一個(gè)酶符號的二級抗體來測定抗原的量。測定抗原量的辦法是參加該酶的底質(zhì)（substrate），作用后發(fā)作呈現(xiàn)的色彩深淺和樣本中的抗原量呈正比的，依此原理計(jì)算出樣本中的抗原總量或濃度。
　　1.直接法（direct ELISA）
　　將抗原直接固定在固相載體上，參加酶符號的一級抗體，即可測定抗原總量，此一級抗體的特異性非常重要。
　　優(yōu)勢：操作手續(xù)簡略，因無須運(yùn)用二抗可防止交互反響。
　　缺陷：實(shí)驗(yàn)中的一抗都得用酶符號，但不是每種抗體都適合做符號，費(fèi)用相對進(jìn)步。
　　2.間接法（indirect ELISA）
　　此測定辦法與直接法相似，不一樣在于一級抗體沒有酶符號，改用酶符號的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。
　　優(yōu)勢：二抗能夠加強(qiáng)信號，并且有多種挑選能做不一樣的測定剖析。不加酶符號的一級抗體則能保存它zui多的免疫反響性。
　　缺陷：交互反響發(fā)作的機(jī)率較高。
　　3.雙抗體夾心法（sandwich ELISA）
　　被檢測的抗原包被在兩個(gè)抗體之間，其間一個(gè)抗體將抗原固定于固相載體上，即捕捉抗體。另一個(gè)則是檢測抗體，此抗體可用酶符號后直接測定抗原的量；或不符號，再透過酶符號的二級抗體來測定抗原的量。這兩種抗體有必要當(dāng)心選擇，才可防止交互反響或競爭一樣的抗原部位。
　　優(yōu)勢：高活絡(luò)、高專一性，抗原無須事前純化。
　　缺陷：抗原必定得具有兩個(gè)以上的抗體部位。
　　4.競爭法（competitive ELISA）
　　樣本里的抗原（自在抗原）和純化并固定在固相載體上的抗原（固定抗原）一同競爭一樣的抗體，當(dāng)樣品里的自在抗原越多，就能夠越多的抗體，而固定抗原就只能到較少的抗體，反之亦然。經(jīng)清潔過程，洗去自在抗原和抗體的復(fù)合物，只留下固定抗原和抗體的復(fù)合物，拿來與只要固定抗原的對照組成果相比擬，依據(jù)呈色區(qū)別就可計(jì)算出樣品里的抗原含量。
　　優(yōu)勢：可適用比擬不純的樣本，并且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。
　　缺陷：全體的敏感性和專一性都較差。
　　ELISA技術(shù)：
　　根據(jù)細(xì)胞法（cell-based ELISA）：
　　是一種新的定性蛋白檢測技術(shù)，將細(xì)胞直接在微孔板里培育，待檢測時(shí)，不需抽提蛋白和裂解細(xì)胞，便可直接丈量微孔板里蛋白經(jīng)影響或抑制作用后的改變。
　　優(yōu)勢：無需裂解細(xì)胞，所以方針蛋白丟失zui少，可測定完好細(xì)胞、黏附細(xì)胞、還有非粘附細(xì)胞。
　　缺陷：不能測定抗原量。